Design, synthesis, characterization, and evaluation of 3D synthetic scaffolds for T and CAR-T cells culture and co-cultures

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Lizana Vasquez, Gaby del Rocio
Embargoed Until
Torres Lugo, Madeline
College of Engineering
Department of Chemical Engineering
Degree Level
During the manufacturing process of CAR-T cell products, there are many challenges that researchers are currently addressing. One of them is the need to enhance the expansion of T and CAR-T cells, and another is to evaluate the potency of CAR-T cells against tumor spheroids. Therefore, this research aims to design, characterize, and evaluate a thermosensitive terpolymer capable of encapsulating and harvesting cells while reducing mechanical manipulation and allowing microscopic monitoring. For this purpose, three different monomers, including N-isopropylacrylamide, boronic acid, and poly(ethylene glycol), were selected to form a synthetic-based hydrogel scaffold. Different techniques such as the Sol-Gel transition, proton nuclear magnetic resonance (1H-NMR), and Fourier-transformed infrared spectroscopy (FT-IR) were used to characterize the terpolymers resulting from various combinations of monomers. The FT-IR and 1H-NMR spectra confirmed the success of the polymerization and its reproducibility in manufacturing, while the Sol-Gel transition allowed confirming the formation of the hydrogel at 37°C. The feasibility of the most promising terpolymers for 3D in vitro cell culture was evaluated with various cell types, including adherent cancer cell lines SKOV-3, U87-GBM, and patient-derived GSC-GBM. In addition, Jurkat, CD4+ T, Pan-T, and CAR-T suspension cell lines were successfully encapsulated, cultured, and expanded within terpolymer scaffolds. In addition, co-culture experiments of activated T cells with encapsulated U87, and anti-GD2 CAR-T cells with encapsulated GSCs, were performed. Co-culture experiment results provided evidence that T cell migration through the terpolymer matrix to reach the encapsulated spheroids was possible and further analyses of T cell potency could be performed after harvesting cells from terpolymer scaffolds. In conclusion, obtained results indicated that the terpolymer material could be successfully used for cell culture applications and it has the potential to be used in cell potency assays development as well as cell manufacture.

Durante el proceso de fabricación de productos de células CAR-T, existen muchos desafíos que los investigadores están abordando actualmente. Uno de ellos es la necesidad de potenciar la expansión de las células T y CAR-T, y otro es evaluar la potencia de las células CAR-T frente a esferoides tumorales. Por lo tanto, esta investigación tiene como objetivo diseñar, caracterizar y evaluar un terpolímero termosensible capaz de encapsular y recolectar células mientras reduce la manipulación mecánica y permite el monitoreo microscópico. Para este propósito, se seleccionaron tres monómeros diferentes, N-isopropilacrilamida, ácido borónico y poli(etilenglicol), para formar un andamio de hidrogel sintético. Se utilizaron diferentes técnicas como la transición Sol-Gel, la resonancia magnética nuclear de protones (1H-NMR) y la espectroscopia infrarroja transformada de Fourier (FT-IR) para caracterizar los terpolímeros resultantes de varias combinaciones de monómeros. Los espectros FT-IR y 1H-NMR confirmaron el éxito de la polimerización y su reproducibilidad en la fabricación, mientras que la transición Sol-Gel permitió confirmar la formación de hidrogel a 37°C. La viabilidad de los terpolímeros más prometedores para el cultivo celular 3D in vitro se evaluaron con varios tipos de células, incluidas las líneas celulares de cáncer adherente SKOV-3, U87-GBM y derivadas de pacientes GSC-GBM. Además, las líneas celulares en suspensión Jurkat, CD4+ T, Pan-T y CAR-T se encapsularon, cultivaron y expandieron con éxito dentro de andamios de terpolímero. También se realizaron experimentos de co-cultivo de células T activadas con U87 encapsulado y células CAR-T anti-GD2 con GSC encapsuladas. Los resultados del co-cultivo proporcionaron evidencia de que era posible la migración de células T a través de la matriz de terpolímero para alcanzar los esferoides encapsulados y que se podía realizar análisis adicionales de la potencia de las células T después de recogerlas de los andamios de terpolímero. En conclusión, los resultados obtenidos indicaron que el material de terpolímero podría usarse con éxito para aplicaciones de cultivo celular y tiene el potencial para usarse en el desarrollo de ensayos de potencia celular, así como en la fabricación de células.
Cell manufacturing,
Polymer synthesis and characterization,
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Lizana Vasquez, G. del R. (2023). Design, synthesis, characterization, and evaluation of 3D synthetic scaffolds for T and CAR-T cells culture and co-cultures [Dissertation]. Retrieved from