Testing of centrifugal filter devices as a tool to quantify protein-nanoparticle interactions using UV/Vis measurements

Abstract

Centrifugal Filter Devices (CFD) has been tested for the quantification of protein adsorption onto the surface of magnetic nanoparticles coated with biocompatible polymers. Using a phosphate buffered saline wash protocol, the bicinchoninic acid assay (BCA), and mass balance calculations, the amount of protein adsorbed was calculated. The iron in magnetic cores interferes with the BCA assay because it remains in the supernatant after centrifugation. CFD was considered an attractive alternative, because in principle it could retain colloidally stable nanoparticles, leaving unbound protein to be quantified in the filtrate. Magnetic nanoparticles were synthesized by co-precipitation and grafted with Carboxylmethly Dextran or silanized polyethylene glycol. Proteins used for this study include anionic and cationic proteins: Bovine Serum Albumin and Lysozyme from Hen Egg White, respectively. In conclusion, CFDs were not suitable for the study of protein-nanoparticle interactions because membrane fouling and concentration polarization were encountered; critical factors that compromised measurement accuracy.

Dispositivos de Filtro para Centrifugación (CFD) fueron evaluados para la cuantificar la adsorción de proteínas sobre la superficie de nanopartículas magnéticas recubiertas con biopolímeros. Utilizando un protocolo de enjuague, el método del ácido bicinconínico (BCA), y cálculos de balance de masa fue estimada la proteína adsorbida. El hierro de los núcleos magnéticos interfiere con el ensayo BCA porque trazas permanecen en sobrenadantes después de centrifugar, por ello CFDs se consideraron atractivos al retener nanopartículas coloidalmente estables; dejando proteínas libres en el filtrado para ser cuantificadas. Nanopartículas fueron sintetizadas vía co-precipitación y cubiertas con carboximetil dextrano o polietilenglicol silanizado. Las proteínas utilizadas incluyen proteínas aniónicas y catiónicas, Albúmina de Suero Bovino (BSA) y la Lisozima de Huevo de Gallina (LYZ), respectivamente. En conclusión, los CFDs no son recomendables para estudiar interacciones proteína-nanopartícula porque factores como el ensuciamiento de la membrana y polarización de la concentración afectan la precisión de las mediciones.