Comunidad bacteriana degradadora de gasolina en un bioreactor de lecho fluidizado

Abstract

The bacterial diversity used to bioremediate gasoline contaminated groundwater in a fluidized bed reactor (FBR) was determined. Isolation and characterization of bacterial populations from the bioremediation system was performed in R2A media. Test included reaction to the Gram coloration, carbon utilization profiles (Biolog®), ability to use gasoline as the sole carbon source and molecular characterization by amplified ribosomal DNA restriction analysis (ARDRA), Box-PCR and 16S rDNA sequence analysis. From a total of 162 distinctive isolates, 75% were gram negative bacilli, 19% gram positive bacilli, 5% gram negative cocci and 1% gram positive cocci. The 162 axenic cultures corresponded to 90 different genetics groups; 53% of which growth in gasoline as sole carbon source. The 86 strains capable of growing in gasoline corresponded to 52 different amplifications patterns in Box-PCR; which are not metabolically related (Biolog® system). In addition, the 16S rDNA of twenty strains were sequenced. The sequences were associated with 3 well-recognized divisions. Phylogenetically, 13 of the sequences are grouped with the alpha, beta and gamma subdivision of the Proteobacteria, one (BW2) with Flexibacter-Cytophaga- Bacteroides group, and six with Firmicutes division (bacterial with High GC content of DNA and Bacillus-Lactobacillus-Streptococcus subdivision). The high degree of microbial diversity in the FBR promoted efficient and stable hydrocarbon removal (>99%), throughout the operation of the system. A better understanding of the biotic behavior will allow to improve and to optimize these units of treatment.

La diversidad bacteriana del proceso de biorremediación de agua contaminada con gasolina en un biorreactor de lecho fluidizado fue determinada. Se aislaron 162 cultivos que se caracterizaron mediante coloración Gram, sistema Biolog®, crecimiento en gasolina como única fuente de carbono (MMG) y molecularmente mediante análisis de restricción de amplificaciones del DNA ribosomal (ARDRA), Box-PCR y secuenciación del 16S rDNA. El 75% de los cultivos fueron bacilos gram-negativos, 19% bacilos gram-positivos, 5% cocos gramnegativos y 1% cocos gram-positivos. Los 162 cultivos se distribuyeron en 90 grupos genéticos; 53% de los cuales, incluyen cepas MMG positivas. Las 86 cepas positivas en MMG presentaron 52 patrones de amplificación por Box-PCR y su caracterización por el sistema Biolog® demostró que no están metabólicamente relacionadas. Adicionalmente, el 16S rDNA de veinte cultivos ha sido secuenciado y analizado. Las secuencias fueron asociadas a tres divisiones bacterianas. Filogenéticamente, 13 secuencias son agrupadas en las subdivisiones alfa, beta y gamma de las Proteobacteria, una secuencia (BW2) con la división Cytophaga- Flexibacter-Bacteroides y seis secuencias con la división Firmicutes (subdivisiones de bacterias con alto contenido de GC y Bacillus-Lactobacillus-Streptococcus). El alto nivel de diversidad microbiana observada en el reactor ha permitido una eficiencia de remoción >99% del contaminante y parece ser importante para la operación estable y eficiente del sistema. Un mejor entendimiento del comportamiento biótico permitirá mejorar y optimizar estas unidades de tratamiento.