Collybia sensu lato of the central and western regions of Puerto Rico: biotechnological capabilities, characterization and identification using traditional and molecular techniques

Abstract

An eighteen month survey at the central and western regions of Puerto Rico was done to monitor Collybia sensu lato (s.l.). The genus Collybia is in the Basidiomycota division, order Agaricales. They are saprophytes and can produce antimicrobial agents and enzymes with industrial significance. Collybia sensu lato is an important group of fungi because over the years have been involved in many taxonomical discrepancies. Molecular approaches such as: DNA sequencing, Restriction Fragment Length Polymorphism and phylogenetics studies based in Internal Transcribed Spacer of rDNA, were used in this study to identify the specimens collected. Light (phase contrast) and Scanning Electron Microscopy techniques were used to morphologically describe the Collybia s.l. specimens. Fourteen Collybioid fungus and related genera were identified in this study; eleven Gymnopus, two Crinipellis and one Marasmius. Also, all the Collybia s.l. collected were tested to determine the production of microbial inhibitory substances. Five of the six Collybia-like fungus tested produced a substance that inhibited the growth of gram-positive and gram-negative bacteria. A specific restriction digestion patterns based in 18S of rDNA, using HaeIII endonuclease, shows a possible biological genetic marker for the genus Gymnopus. Also the microscopic and molecular studies suggest that Collybia s.l. in Puerto Rico is restricted to the genus Gymnopus. Finally, phylogenetics studies based on ITS region of rDNA shows that Marasmius rhyssophylus is more related to the genus Tricholomopsis than to Marasmius, suggesting a new combination: Tricholomopsis rhyssophylus.

Un censo de dieciocho meses fue realizado en la parte central y oeste de Puerto Rico con el propósito de colectar hongos del género Collybia sensu lato (s.l). Este grupo de hongos perteneciente a la división Basidiomycota, Orden Agaricales. Ellos son saprófitos que pueden producir agentes antimicrobianos y enzimas de importancia industrial. Collybia sensu lato es un grupo de hongos de gran importancia, puesto que con el pasar de los años ha estado involucrado en controversias taxonómicas. Técnicas moleculares como: secuenciación de DNA, Patrones de Restricción Polimórfica y estudios filogenéticos basados en la porción Interna Transcrita (ITS) del DNA ribosomal, fueron utilizadas en este estudio para la identificación de los especimenes. Microscopia de Luz (contraste de fases) y Microscopía Electrónica de Rastreo fueron las técnicas utilizadas para describir morfológicamente los especimenes Collybia s.l. Catorce hongos collybioides y géneros relacionados fueron identificados en este estudio; once Gymnopus, dos Crinipellis y un Marasmius. Además, todas las Collybia s.l. colectadas fueron sometidas a pruebas de producción de agentes antimicrobiales. Cinco de los seis Collybia s.l. colectados produjeron una sustancia que podía inhibir bacterias gram-negativas y gram-positivas. Un patrón de restricción basado en el gen 18S del DNA ribosomal, utilizando la endonucleasa HaeIII, mostró un posible marcador para el género Gymnopus. También en estudios microscópicos y filogenéticos sugieren que Collybia s.l. en Puerto Rico está restringido a especies del género Gymnopus. Estudios filogenéticos basados en la porción ITS del DNA ribosomal demuestran que Marasmius rhyssophylus está mas relacionado al género Tricholomopsis que a Marasmius, por lo que se sugiere una nueva combinación: Tricholomopsis rhyssophylus.