Purification and characterization of trypsin from intestinal and pyloric caecal tissues from the silk snapper, Lutjanus vivanus (Cuvier, 1828)

Abstract

In an effort to better understand the chemical digestion of proteins in the silk snapper, Lutjanus vivanus (Cuvier, 1828), and thereby obtain a deeper understanding of how this fish meets its dietary needs for amino acids through its trophic environment, trypsin was purified 10-fold from intestinal and pyloric caecal tissues by sequential application of ammonium sulfate fractionation, size exclusion chromatography, and affinity chromatography. Standard kinetic characteristics of this enzyme were determined. The enzyme displayed optimal activity at pH 8 and 60oC. It was completely or nearly completely inhibited by soybean trypsin inhibitor (SBTI) at a concentration of 0.1% or higher. SDS-PAGE analysis of the purified enzyme revealed a single band with an estimated molecular weight of 26.1 kDa.

Tripsina proveniente del tejido intestinal y ciego pilórico del Chillo de ojo amarillo, Lutjanus vivanus (Cuvier, 1828) fue purificada y caracterizada. Dicho estudio se realizó en el esfuerzo por un mejor entendimiento sobre la digestión química de las proteínas y cómo este pez suple su necesidad de aminoácidos a través de hábitat donde se alimenta. La enzima fue purificada 10 veces mediante proceso de precipitación con sulfato de amonio, seguido por cromatografía de exclusión por tamaño y cromatografía de afinidad. Características sobre la cinética de tripsina, incluyendo el efecto de la temperatura, pH e inhibidor sobre la hidrólisis del sustrato artificial TAME, fueron determinadas. La enzima presentó actividad óptima a pH 8.0 y a 60oC. Tripsina fue parcialmente o completamente inhibida, por el inhibidor de soya de tripsina (SBTI por sus siglas en ingles) a concentración de 0.1% o más. En el análisis de la electroforesis SDS-PAGE de la proteína purificada, se pudo observar una banda sencilla con un peso molecular estimado de 26.1 kDa.