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Study of a possible replication origin function of map units 88-100 of parvovirus Luiii in HeLa cells
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Abstract
Studies to elucidate the mechanism of parvoviral replication are ongoing
due to their potential as transient vectors for human gene therapy. Parvovirus
LuIII, a single stranded DNA virus, has short double-stranded hairpin structures
at the 3´and 5´ ends which serve as primers for replication. A replication origin at
the left terminus has been characterized, yet a replication origin at the right
terminus has not been identified. Homology of an A/T rich region at the
5’ terminus of LuIII with the autonomously replicating sequences of yeast, suggests
a replication origin function. To determine if the A/T sequence could function as
an origin of replication in higher eukaryotic cells, a plasmid lacking an origin of
replication and containing the reporter gene DsRed2 and the A/T sequence was
constructed and transfected into HeLa cells. The results revealed a replication
origin function for the LuIII A/T sequence.
Los estudios para dilucidar el mecanismo de replicaciĂ³n de parvovirus estĂ¡n en curso debido a su potencial como vector transciente para la terapia gĂ©nica humana. Parvovirus LuIII es un virus de ADN de hebra sencilla, sin embargo los terminales 3' y 5 ' se pliegan adquiriendo una forma de horquilla los cuales sirven como cebadores en la replicaciĂ³n. El terminal izquierdo del genoma de LuIII se ha caracterizado y se ha propuesto la presencia de un origen de replicaciĂ³n, sin embargo, en el terminal derecho no se ha identificado hasta el momento ningĂºn origen de replicaciĂ³n. En el terminal 5´del genoma de LuIII se encuentra una regiĂ³n rica en A/ T la cual muestra una gran similitud con la secuencia de replicaciĂ³n autĂ³noma presente en levaduras, sugiriendo que esta regiĂ³n podrĂa funcionar como origen de replicaciĂ³n. Para determinar si esta secuencia rica en A/ T podrĂa funcionar como un origen de replicaciĂ³n en cĂ©lulas eucariotas superiores, se construyĂ³ un plĂ¡smido que contiene un gen reportero DsRed2 y carece de un origen de replicaciĂ³n, en su reemplazo se encuentra la secuencia rica en A/ T. CĂ©lulas HeLa fueron transfectadas con dicho plĂ¡smido. Los resultados sugieren que la secuencia rica en A/ T de LuIII aparenta tener una posible funciĂ³n como origen de replicaciĂ³n.
Los estudios para dilucidar el mecanismo de replicaciĂ³n de parvovirus estĂ¡n en curso debido a su potencial como vector transciente para la terapia gĂ©nica humana. Parvovirus LuIII es un virus de ADN de hebra sencilla, sin embargo los terminales 3' y 5 ' se pliegan adquiriendo una forma de horquilla los cuales sirven como cebadores en la replicaciĂ³n. El terminal izquierdo del genoma de LuIII se ha caracterizado y se ha propuesto la presencia de un origen de replicaciĂ³n, sin embargo, en el terminal derecho no se ha identificado hasta el momento ningĂºn origen de replicaciĂ³n. En el terminal 5´del genoma de LuIII se encuentra una regiĂ³n rica en A/ T la cual muestra una gran similitud con la secuencia de replicaciĂ³n autĂ³noma presente en levaduras, sugiriendo que esta regiĂ³n podrĂa funcionar como origen de replicaciĂ³n. Para determinar si esta secuencia rica en A/ T podrĂa funcionar como un origen de replicaciĂ³n en cĂ©lulas eucariotas superiores, se construyĂ³ un plĂ¡smido que contiene un gen reportero DsRed2 y carece de un origen de replicaciĂ³n, en su reemplazo se encuentra la secuencia rica en A/ T. CĂ©lulas HeLa fueron transfectadas con dicho plĂ¡smido. Los resultados sugieren que la secuencia rica en A/ T de LuIII aparenta tener una posible funciĂ³n como origen de replicaciĂ³n.
Description
Date
2008
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Collections
Keywords
Parvoviral replication, Parvovirus LuIII, Human gene therapy, Single stranded DNA virus