Study of a possible replication origin function of map units 88-100 of parvovirus Luiii in HeLa cells

Abstract

Studies to elucidate the mechanism of parvoviral replication are ongoing due to their potential as transient vectors for human gene therapy. Parvovirus LuIII, a single stranded DNA virus, has short double-stranded hairpin structures at the 3´and 5´ ends which serve as primers for replication. A replication origin at the left terminus has been characterized, yet a replication origin at the right terminus has not been identified. Homology of an A/T rich region at the 5’ terminus of LuIII with the autonomously replicating sequences of yeast, suggests a replication origin function. To determine if the A/T sequence could function as an origin of replication in higher eukaryotic cells, a plasmid lacking an origin of replication and containing the reporter gene DsRed2 and the A/T sequence was constructed and transfected into HeLa cells. The results revealed a replication origin function for the LuIII A/T sequence.

Los estudios para dilucidar el mecanismo de replicación de parvovirus están en curso debido a su potencial como vector transciente para la terapia génica humana. Parvovirus LuIII es un virus de ADN de hebra sencilla, sin embargo los terminales 3' y 5 ' se pliegan adquiriendo una forma de horquilla los cuales sirven como cebadores en la replicación. El terminal izquierdo del genoma de LuIII se ha caracterizado y se ha propuesto la presencia de un origen de replicación, sin embargo, en el terminal derecho no se ha identificado hasta el momento ningún origen de replicación. En el terminal 5´del genoma de LuIII se encuentra una región rica en A/ T la cual muestra una gran similitud con la secuencia de replicación autónoma presente en levaduras, sugiriendo que esta región podría funcionar como origen de replicación. Para determinar si esta secuencia rica en A/ T podría funcionar como un origen de replicación en células eucariotas superiores, se construyó un plásmido que contiene un gen reportero DsRed2 y carece de un origen de replicación, en su reemplazo se encuentra la secuencia rica en A/ T. Células HeLa fueron transfectadas con dicho plásmido. Los resultados sugieren que la secuencia rica en A/ T de LuIII aparenta tener una posible función como origen de replicación.