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Study of an ARS-like function of map units 88-100 of parvovirus LUIII
De Jesús-Maldonado, Idaris
De Jesús-Maldonado, Idaris
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Abstract
The synthesis of minus strand by parvovirus LuIII requires replication from the
left palindrome of the plus strand DNA. An origin of replication yet to be identified must
be present at the right end of the minus strand, required for the synthesis of plus
strand. Parvovirus LuIII contains a unique A/T-rich sequence that shares a sequence
homology with the autonomously replicating sequences (ARS) found in yeast. To test
if the A/T rich region and sequences downstream the A/T sequence are responsible
for autonomous replication, nucleotides 4527 to 5135 of LuIII were cloned (pUraLu88-
100) into a vector containing the URA3 gene as an auxotrophic marker. pUra-Lu88-
100 was transformed into Saccharomyces cerevisiae (SEY S288C,ura3-) by the
electroporation method. Plasmid DNA was isolated from the resulting colonies and
transformed into Echerichia coli DH5α cells. Analysis performed to the plasmid
rescued from yeast indicate that pUra-Lu88-100 was capable of existing in a free state
in S. cerevisiae, suggesting that the elements required for a limited ARS-like function
are present in at the right end of the LuIII viral genome.
La sÃntesis de la hebra negativa por el parvovirus LuIII requiere la replicación del palindrome izquierdo de la hebra positiva de ADN. Un origen de replicación que no a sido identificado debe estar presente en el extremo derecho de la hebra negativa. El parvovirus LuIII contiene una secuencia única rica en A/T que comparte homologÃa con las secuencias de replicación autónoma encontradas en levaduras. Para evaluar si la región rica en A/T y las secuencias rÃo abajo de ésta son responsables de replicación autónoma, los nucleotidos 4527 a 5135 de LuIII fueron clonados (pUraLu88-100) en un vector que contenÃa el gene URA3 como un marcador auxotrófico. pUra-Lu88-100 fue transformado en el S. cerevisiae (SEY S288C, ura3 -) por el método de electroporación. El ADN del plásmido fue aislado de las colonias resultantes y transformado posteriormente en células del E. coli DH5α. Análisis realizados al plásmido rescatado de la levadura indican que el clon pUra- Lu88-100 fue capaz de existir en un estado libre en S. cerevisiae, sugiriendo que los elementos requeridos para llevar a cabo replicación autónoma limitada similar a la descrita para ARS están presentes en el terminal derecho del genoma viral de LuIII.
La sÃntesis de la hebra negativa por el parvovirus LuIII requiere la replicación del palindrome izquierdo de la hebra positiva de ADN. Un origen de replicación que no a sido identificado debe estar presente en el extremo derecho de la hebra negativa. El parvovirus LuIII contiene una secuencia única rica en A/T que comparte homologÃa con las secuencias de replicación autónoma encontradas en levaduras. Para evaluar si la región rica en A/T y las secuencias rÃo abajo de ésta son responsables de replicación autónoma, los nucleotidos 4527 a 5135 de LuIII fueron clonados (pUraLu88-100) en un vector que contenÃa el gene URA3 como un marcador auxotrófico. pUra-Lu88-100 fue transformado en el S. cerevisiae (SEY S288C, ura3 -) por el método de electroporación. El ADN del plásmido fue aislado de las colonias resultantes y transformado posteriormente en células del E. coli DH5α. Análisis realizados al plásmido rescatado de la levadura indican que el clon pUra- Lu88-100 fue capaz de existir en un estado libre en S. cerevisiae, sugiriendo que los elementos requeridos para llevar a cabo replicación autónoma limitada similar a la descrita para ARS están presentes en el terminal derecho del genoma viral de LuIII.
Description
Date
2004
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Keywords
Parvovirus LuIII, A/T-rich sequence, Saccharomyces cerevisiae (SEY S288C,ura3-), Echerichia coli DH5α cells, LuIII viral genome